免疫层析正确度验证 — 添加回收率/基质效应/方法学比对EP09-A3/偏倚评估全套方案

免疫层析正确度验证三大方法(CLSI EP09-A3/YY/T 1789.2): 一、使用参考物质:有互换性的有证参考物质CRM/国家标准品。至少3个浓度水平/每水平重复≥6次。互换性缺失=基质效应。 二、方法学比对(最主流):≥100份患者样本/浓度均匀覆盖测量区间。比较方法=参考测量程序或主流优质方法。回归方法:Passing-Bablok(稳健无分布假设)>Deming(需预知方差比)>OLS(仅X为固定)。等效判定:截距a的95%CI包含0/斜率b的95%CI包含1→等效。偏倚=(回归估计值−参考值)/参考值×100%/各浓度水平<允许TE的1/2。 三、添加回收试验:适用可获得纯品的小分子标志物(蛋白类标志物较难)。配制≥3浓度回收样品。标准溶液加入体积≤总体积10%(控制基质效应)。至少1个浓度在医学决定水平附近。每浓度重复≥3(部分标准≥6次)。回收率(%)=(加标测定值−样本测定值)/添加浓度×100%。可接受范围85~115%。 四、基质效应评估:选择至少10份不同来源(健康+患者)阴性样本→添加等量分析物→测定后比较信号偏差。偏差>±20%表明存在显著基质效应→需优化样本垫处理/稀释液配方/缓冲体系。不同样本类型(全血vs血清vs血浆vs尿液)需分别验证互换性。 五、总误差综合评价:TE=|Bias|+2SD(Westgard模型)。当TE<允许总误差→准确度可接受。 来源:CLSI EP09-A3+YY/T 1789.2-2021+小桔灯网+嘉峪检测网