胶体金标记后纯化: 离心条件/浓缩倍数/金标保存液配方/长期储存

胶体金标记后纯化与保存全参数: 离心条件(按粒径):5nm→60,000~125,000g/4℃/60min。10nm→45,000~120,000g/30~60min。15nm→25,000rpm(约120,000g)/30~45min。20nm→14,000~120,000g/30~60min。40nm→14,000~15,000g/4℃/60min。通用:先用低速离心(250~4,800g/20min)去除大颗粒聚集体→取上清高速离心沉淀金标物→弃上清→含稳定剂缓冲液复溶→重复2~4次。 梯度分步离心(大体积):6,000rpm/30min取沉淀→上清8,000rpm/30min取沉淀→上清12,000rpm离心至上清清澈→三次沉淀合并复溶。 浓缩倍数:离心法:沉淀复溶至原体积1/10~1/20(10~20倍浓缩)。凝胶过滤+透析袋浓缩:浓缩至原体积1/5~1/10。最终OD₅₂₀控制:40nm金A₅₂₀≈0.35(1:20稀释);20nm金A₅₂₀≈0.30;应用液OD₅₂₀=0.2~0.4;A₅₄₀≈1.5。 金标保存液基础配方:0.01M Tris-HCl pH8.5+1%BSA(保护蛋白+封闭非特异吸附)+10~20%蔗糖(干燥保护剂)+0.2~0.5mg/mL PEG20000(稳定剂防聚集)+0.02~0.05%NaN3(防腐)。可选添加:海藻糖5~10%(替代部分蔗糖效果更优);甘油50%(防冻/-20℃可存1年以上);酪蛋白(强封闭/但需慎用避免抑制正常免疫反应)。 金垫处理液:0.02M Borate pH8.2+1%BSA+0.5%Tween-20+5%蔗糖。 储存条件:4℃避光(含NaN3数月有效)。-18~-20℃(加50%甘油1年以上)。禁止无甘油保护反复冻融(破坏水化膜不可逆聚集)。干燥后金标垫密封(4℃干燥密封1~2年/需加速稳定性验证)。对光敏感须避光保存。 常见储存问题:标记后4℃过夜沉淀→标记pH偏低或蛋白量不足→重做标记。金标垫释放不完全→糖浓度不足或受潮→增加蔗糖至10~20%+严格控制车间湿度。干燥后金粒变色→干燥温度过高或时间过长→不超过5h/37℃。 来源:生物谷+白话胶体金+非洲猪瘟实验手册+CNKI