胶体金免疫层析技术总览 — CAIVD体外诊断网+百度百科
胶体金免疫层析技术(GICA)原理与应用:
核心原理:胶体金纳米颗粒(20~60nm)标记抗体/抗原→NC膜毛细迁移→抗原抗体结合→金粒聚集显红色条带
试纸条结构(5层):PVC底板→样本垫→结合垫(金标)→NC膜(T+C线)→吸水垫
两种检测模式:
双抗夹心法:金标Ab1+Ag→T线Ab2捕获(大分子,至少2个表位)
竞争法:金标Ab+样本Ag与T线固定Ag竞争(小分子半抗原)
关键工艺参数:
- 粒径选择:30nm最常用(兼顾灵敏度与稳定性)
- 标记pH:抗体pI+0.5~1.0(常用pH 8.0~9.0)
- 抗体用量:5~15μg/mL胶体金(盐絮凝法测定)
- T线包被:1.0~3.0mg/mL,0.8~1.2μL/cm
- C线包被:羊抗鼠IgG 0.3~1.0mg/mL
优势:操作简便(15min)、无需仪器、常温储存、成本低廉
局限:灵敏度低于荧光法(差10~100倍)、仅定性/半定量
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