免疫层析定量试剂LoB/LoD/LoQ完整建立验证方案 — YY/T 1789.3-2022/CLSI EP17-A2

免疫层析定量试剂LoB/LoD/LoQ完整方案(YY/T 1789.3-2022等同CLSI EP17-A2): 一、三个概念关系:空白限LoB<检出限LoD≤定量限LoQ。建立顺序严格为LoB→LoD→LoQ。 二、LoB建立(空白限):实验设计:≥2试剂批/≥3天/≥5空白样本/每样本≥2重复/每批≥60次。数据分析:正态用参数法LoB=μB+1.645σB(第95百分位)。非正态用非参数百分位数法(位置=0.5+B×0.95)。验证:1空白样本≥20次/≤3次>LoB→通过。 三、LoD建立(检出限):经典法(最常用):≥4个低浓度样本(浓度LoB~4×LoB)/≥2批/≥3天/≥2重复/每批≥60次。公式:LoD=LoB+cβ×SDL(cβ=1.645/[1−1/(4×f)])。精密度曲线法(高变异系统):≥5浓度/≥2批/≥5天/4~5重复/≥125次→SD-浓度曲线推算LoD。Probit法(定性试剂):≥3样本各5梯度稀释/阴性≥30/每稀释≥20重复→95%命中率浓度=LoD。验证:LoD浓度样本≥20次/≥95%结果>LoB→通过。 四、LoQ建立(定量限):实验设计:≥4个已知浓度低水平样本/≥2批/≥3天/≥3重复/每批≥36次。数据分析:总误差TE=|Bias|+2SD。接受标准:TE≤20%(或偏差≤±15%且CV≤20%)。从候选浓度中找能同时满足精密度和准确度要求的最低浓度。验证:LoQ浓度样本≥25次→评估偏差和TE符合率。 五、样本量速查:LoB建立60次/批→LoD经典法60次/批→LoD精密度曲线法125次→LoD Probit法≥60次(5梯度×20重复÷3样本≈100次)→LoQ建立40次/批→LoB验证20次→LoD验证20次→LoQ验证25次。 六、关键注意事项:所有样本基质应尽量接近真实临床样本。空白样本需确认真正零浓度(去除被测物)。实验需覆盖多个试剂批号以代表批间变异。低浓度样本应独立制备(避免系列稀释的累积误差)。接受标准需在实验前预设(不可事后调整)。 来源:YY/T 1789.3-2022(等同CLSI EP17-A2)+CLSI EP17-A2(2012)+WEIVD/嘉峪检测网EP解读