乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法 - 全文

ICS 11 020 C 50 中华人民共和国卫生行业标准 Ws/T361-⒛ll 乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法 Reference procedure For the measurement of catalytic activity concentration of lactate dehydrogenase 2011-12-14 发布中华人民共和国卫生部发布 2012-06-o1 实施、Vs/T 361-ˉ2011 本标准按照GB/T1.1— ⒛09给出的规则起草。本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的《I「CC37℃酶催化活性浓度测定原级参考方法第3部分:乳酸脱氢酶催化浓度测定参考方法》,丿仁参考IsO15193:2009《体外诊断器具—— 生物源样品中量的测定—— 参考测定程序的表述》适当增加内容。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位:茼都医科大学附属北京朝阳医院。本标准主要起草人:贾慧敏、赵书弘、王清涛、杨振华。亠刖曰、Vs/T 361-ˉ 2011 乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法 1 范围本标准规定了在临床医学应用中,测定乳酸脱氢酶(△DH)催化活性浓度的参考方法。本标准主要适用于参考实验室,作为乳酸脱氢酶催化活性浓度测定的溯源,也可作为与酶催化活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源,可供有关认可单位及质量管理部门应用。 2 术语和缩略语 2.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 2.1.1 原始样本 primary mmpIe 最初从一个系统中取出的一个或几J个部分的集合物,旨在提供该系统的信息或作为对该系统做出决定的基础。注:在某些情况下、所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此时取样系统是这些系统的组成部分。 2.1.2 实验室样本 Iabc,ratory mmp【e 准各送到实验室或实验室接收的川于测定的原始样本或原始样本的分样本。 2,1.3 分析样本 anaIyticaI sample 白实验室样本制备的、可从巾取出分析部分的样本。 ` 注:在取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理。 2.1.4 彡卜+f音阝/9,k anaIyticaI portion 从分析样本中取出的用于实际测定和观察的物质部分。注:如果不需预处理,分析部分亩接从原始样本或实验室样本中取出。某些怙况下,需将分析部分溶解成分析溶液冉上机测定。 2.1,5 分析溶液 anaIyticaI solution 将分析部分溶解在气体、液体或固体巾而制备的溶液,溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。 21.6 (某一物质系统的)基质 matriX(of a materiaI Wstem) 一个物质系统中除被分析物之外的所有成分。 2,1.7 参考方法 reference procedure 在校准或表征标准物质时为提供测定结果所采用的测定方法,适用丁评定由同类量的其他测定方法获得的被测定量值的测定止确度。 Ws/T361ˉ ˉ2011 2,1,8 测定系统的灵敏度变nsitivity of a measuriⅡg system 灵敏度 scnsitivity 测定系统的示值变化除以相应的被测定值变化所得的商。注1:测定系统的灵敏度可能与被测定的蚩值有关。注2:所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力。 2.1.9 彡卜lf卡手乒旮l± anaIytical specificity 测定方法只测定可测定的量的能力。 2.1.10 分析干扰 anaIyticaI interference 由一个影响量引起的系统测定误差,该影响壁向身在测定系统中不产生信号,但它会引起示值的增高或降低。 2.1,11 最彡口向量莨 infIuence quantity 被测定以外的可影响测定结果的壁。 2.1.12 被测量 measurand 拟测定的量。注1:对被测定的说明要求了解量的种类,以及含有该址的现象、物体或物质状态的描述,包括有关成分及所涉及 n勺化学实体。注2:在VIM第二版和IEC60θ 5ll s0θ :⒛01中.被测定定义为受到测定的量。注3:测定包括测定系统和实施测定的条件,它刂能会改变研究屮的现象、物体或物质,使被测定的坩町能不同于定义的被测定。在这种情况卜。适肖的修正楚必耍的‘ 2.1.13 检出限 detection Ⅱmit,Ⅱmit of detection 由给定测定方法获得的测得值,其声称的物质成分不存在的误判概率为 `,声称物质成分存在的误判概率为α。注1:国际± lT论和应用化学联合会(1UPAC)推荐α和卩的默认值为0,05。注2:有时使用缩写词L()D。注3:不要用术语“灵敏度”表示“检出限"。 2.1.14 校准品 caIibrator 用丁校准的测定标准。 2.2 缩略语下列缩略语适用于本文件。 LDH:乳酸脱氢酶(lac1a1e clehydrogemse) ALT:丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase) AST:大门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotra灬ferase) NAD:氧化型β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β -nic° 1inamide~adenine dinucle。tide,oxidized forn1) NADH:还原型β 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(β -ni∞1inamide~adenine dinucleo1ide,reduced form) IFCC:国际临床化学与检验医学联合会(international federation of dinical chemistry and laboratorv medicine) S()P :标准操作方法(s1andard opera1ion procedure) Ws/T361-ˉ 2011 3 参考方法描述 3.1 测定原理和方法本法采用乳酸脱氢酶催化乳酸,生成丙酮酸,同时NAl)还原成NADH、反应式如下 : L-(+)-孚1酸+NΛ D|竺翌丙酮酸+NΛ DH+H 在339nm下,监测NAD的还原速率,吸光度的上升速率与LDH催化活性浓度呈正比。 3.2 检查列表 3.2.1 试剂列表将所用试剂按表l列出。表1 试剂列表 3,2.2 分光光度计和辅助仪器列表参考实验室应在表2登记主要测定仪器(分光光度计)和主要辅助仪器(点式温度计、天平、pH计、恒温水浴箱、稀释配液仪、移液器等)。表2 分光光度计和辅助仪器通用名称.缩略语 N-甲基-D-葡萄糖胺 L(+)-乳酸,一锂盐甲葡胺,MEG β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸.氧化型,游离酸 NAD游离酉炱 β烟酰胺腺嘌呤二核苻酸,氧化型,二水合钾盐 NΛD钾盐质量与双蒸水类似的高纯度水(电导率 <2uS· cm l,pH6~7。硅酸盐(0.1mg· I'l) JCTLM和(或)同家批准的参考物质常规系统校准品仪器名称 1i产厂家 | 型分光光度计点式温度计恒温水浴箱稀释配液仪 Ws/T361ˉ ˉ2011 3.3 试剂 3.3.1 试剂原料信息按表3详细填写试剂原料详细信息。表3 试剂原料详细信息试剂系统名通用名 ` LDH测定所用每个试剂原料详细信息表格见附录B。如怀疑一种化学药品含有不纯的物质影响了分析物的催化活忤,应进行进一步的研究,例如,比较不同厂家和不同批号的产品。建议使川在对比试验中已经鉴定或认町的试剂。以下一种试剂需耍注意安伞 : 盐酸:健康危害:接触其蒸气或烟雾,可引起急性中毒,出现眼结膜炎,鼻及口腔黏膜有烧灼感,鼻衄、齿龈出血,气管炎等。误服可引起消化道灼伤、溃疡形成,有可能引起胃穿孔、腹膜炎等。眼和皮肤接触可致灼伤。慢性影响:长期接触,引起慢性鼻炎、慢性支气管炎、牙齿酸蚀症及皮肤损害。操作人员必须经过专门培训,严格遵守操作规程,佩戴自吸过滤式防毒面具(全面罩),穿橡胶耐酸碱服i戴橡胶耐酸碱手套。远离易燃、可燃物。 3.3.2 试剂溶液 3.3,2,1 一般要求制备溶液时各成分给出的质量是指100%含量。如果化学物质的含量低于100%E例如y(%)],则应用lAl子:F(。mt"=100/y,计算出与给出质量相当的某化学物质的质量。溶液的制备应使用质量与双蒸水类似的高纯度水(电导率<2us· cm l,pH6~7,硅酸盐 (0.1mg· Lˉ l)。每次称重的扩展(虑=2)不确定度(包括物质纯度的不确定度)(正态分布).应≤1.5%。 3,3,2.2 反应溶液称量7.30gN-甲基-D-葡糖胺、0.552g乳酸一锂盐,将上述物质按以下步骤处理 : ——溶在约80mI'水中 ; ——用2m° l· Ll的盐酸调节pH(37℃)歪刂9.4; 4 信息指标内容 (讠Λs,CΛ RN注册号生产厂家货号/批弓分子式相对分子质量纯瘦特定合格要求(如有) 危险度贮存要求失效期、Vs/T 361-ˉ2011 —— 转移至100mL容量瓶中 ; —— 将容量瓶和水平衡至⒛℃ ; —— 加水(20℃)至容量瓶的刻度线。最终配制的溶液中N-甲基-D-葡糖胺浓度为373,8mmol· Ll、孚L酸一锂盐浓度为57.50mmol· L1 该溶液2℃~8℃稳定忤为1个月。 3.3,2,3 起始试剂溶液称量0.240g NAD游离酸及0,558g NAD二水合锂盐,将⊥述物质按以下步骤处理 : — — 溶于约6mL水中; — — 转移至10mL容量瓶 ; —— 将容量瓶和水平衡至⒛℃ ; — — 加水(2O℃)至刻度线。最终配制的溶液中N`0游离酸浓度为36.23mmd· LI、NΛD二水合锂盐浓度为m。78mmd.I'l。该溶液2℃~8℃稳定性为l月。注1:在配制起始试剂溶液时,只用NAD游离酸,不川NΛD锂耠(如IFCC30℃参考方法)会适度地降低终反应混合液的pH值。起始溶液含有NAD游离酸和NAD锂盐的优点有:一是终反应混合液的pH值不会降低;二是NAD吸光度的变化强烈依赖pH值.然而,由于pH值的变化丨 nF引起的吸光度的变化并丨丨 :白然发 '丨:。困此,如果NAD游离酸被作为起始溶液加人到碱忤反应溶液巾,刃阝么试剂空白率在4min~6min仍为|线r+。但如果起始反应溶液包含NAD游离酸和NAD钾盐两种物质,将大大减小这种彩响. 注2:上述推荐的NΛD游离酸和NΛD锂盐棍合物溶解相当缓慢。升高温庋(到10℃)可加速溶解过程。 3.3.3 温度对缓冲溶液pH的影响当温度偏离37℃)卩寸,调节pH值的方法:将温度计与pH电极同时浸人混合液中。然后将溶液边搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的pH值。在校准、控制和调节pH的过程中,搅拌速度耍一致。pH电极应位于被搅拌溶液的中心。应考虑到在调节pH的滴定过程中,温度是可能改变的囚素。为此,接近靶值时应重新控制温度 , 如果需要,根据附录A调辂pH靶值。同样的方法也适用于pH训·的温度补偿调节。配制反应溶液时,需根据不同温度调整pH值。参阅附录A来调节溶液的pH值。 3.4 仪器分光光度计及辅助仪器主要性能的要求,见表4。表4 分光光度计、辅助仪器主要性能的要求仪器名称分光光度计、 `吧件性能指标波长准确度/nm ⅡCC参考方法要求 339± 1(虍=2) 带宽nm ≤≤2 pH计点式温度汁光径/mm Ws/T361ˉ ˉ2011 3,5 采样和样本 3,5,1 通则参考实验室主要接受外检样本,不白行采ml,一般不需考虑分析前因素对样本特性的影响。 3.5,2 对收检样本的要求官以表格肜式记录样本的详细信息,见表5。对不符合样本收检要求的样本应及时与委托方联系。表5 LDH收检样本要求 3.6 测定系统和分析部分的准备 3.6.1 测定系统的准备 3,6.1.1 分光光度计准备测定T作前,按已制定的S0P文件对分光光度计进行检查,填写表6。表6 分光光度计准备要求指标内容可接受样本种类 □血l清 □lll浆 □贝他町接受样本类型皋质类型说明 □冻干粉 □人血清 □液体 □牛血清 □冰冻 □其他 □水 □其他样本最低数且每支样本最低体积攴每支 mL 允许添加物运输条件 □干冰 □常温 □冰袋 □其他贮存条件 □常温 □4℃ □—zO℃ □-70℃∶ □共他稳定性危险性注意事项准备事项具体内容丌机前检查 □电源 □接地 □电脑 □温度 □湿度 □机身洁洁 □打印机 □是否独h开机 □比色仓洁洁 □比色窗洁洁组合恒温装置 : 测温装置 : 搅拌装置 : 比色杯 : □与分光光度汁迕接完辂 □提前开机 □电± □测温探头勿挤爪、碰撞坚硬物体 □洁洁 □转速 □完整 □清沽度开机注总节项光源灯:□提前预热比色杯:□光径 □比色杯问匹配 6 、Vs/T 361-ˉ2011 表6(续) 准备节项艮体内容仪器性能检查核实楚否在田家计量机构检定含格有效期内每日开机性能检查:□波长准确庋 □波长雾复性 □丞线平商度扫描 □带宽测试 □噪音测试大型实验前性能检查:□氧化钬玻璃检查波长准确度 □国家标准溶液检查吸光度准确度预防性维护分光光度计:□无明显振动 □及时待机 □无线电十扰 □UPS 辅助仪糌: □更换进、出水竹 □定期清沽 □使用后清洁点温计探头、搅拌装置各实验室可根据具体情况制定本实验室分光光度计准备流程图。 3.6.1.2 点式温度计准备测定工作前,按已制定的s()P文件对点式温度计进行检查,填写表7。表7 点式温度计准备各实验室可根据具体情况制定本实验室点式温度计准备流程图。 3.6.1.3 恒温水浴箱准备测定 I∶作前,按已制定的S()P文件对恒温水浴箱进行检查,填写表8。表8 恒温水浴箱测定系统的准备准各事项具体内容廾机前检杏 □电源 □机身清洁 □点式温度计温度探头是否下常 □主机与点式温度计温度探头迕接完整电呈:□杳看剩余电量校准捉示:□合看校准有效期是否到期核实娃否在国家计量机构检定合格效期内大刷实验前性能检查:□用计母合格的标准温庋计检查温庋的准确性主机:□机身清沽温度探头:□使用后及时清沽 □保证苴形、不弯曲廾机注意筝项仪器性能检查顶防性维护开机前检查 □电源 □温度 □机身清洁 □与分光光度计连接 □水上 □进冂水管 □温度校正 □出冂水符 □温度稳定性 □定期更换进口水管 □沽洗滤网 □定期更换出口水管 □水箱内部消毒预防性维护开机注意事项仪器性能检杏 Ws/T361-ˉ 2011 各实验室可根据具体情况制定本实验室恒温水浴箱准备流程图。 36,1.4 稀释配液仪准备(实验室若有) 测定工作前,按已制定的SOP文件对稀释配液仪进行检查,填写表9。表9 稀释配液仪测定系统的准各各实验室可根据具体情况制定本实验室稀释配液仪准备流程图。 3.6.1.5 移液器准备测定T作前,按已制定的sOP文件对移液器进行检查,填写表10。表10 移液器测定系统的准备各实验室可根据具体情况制定本实验室移液器准备流程图。 3,6,1.6 天平准备测定T作前,按已制定的S()P文件对天平进行检查,填写表11。表11 天平准备各实验室可根据具体情况制定本实验室天平准备流程图。 36.1.7 pH计准备测定△作前,按已制定的s()P文件对pH计进行检查,填写表12。 8 准备事项其体内容廾机前检杳 □电源 □温度 □湿度 □机身清洁开机注意事项 □注别器 □移液冂 □符路冲洗仪器性能检查 □加样量正确性 □加样量精密度 □定期￡换注射搽 □定期￡换移液符顶防性维护 □温度 □湿度 □机身清洁 □机械移动 □加样量正确性 □加样母精密度预防性维护 {□ 定期进行保养 □定期校准应用前检查仪器性能检查准备事项 | 具体内容丌机前检查 |□ 电源 □打印机 □水平珠位置开机自检 □电量 □零位显示校准 |箕孟量愿窨昆曩召烬耻 %1罗定合格有效期内每次应用前:仪器白带校准丌机注意事项 {□ 使用前洁洁天平 □电源充足、Vs/T 361-ˉ 2011 表12 pH计准备各实验室可根据具体情况制定本实验室pH计准备流程图。 3.6.2 分析部分的准备 3.6.2.1 分析样本的类型 LDH参考方法测定样本主要有 : —— 参考物质(RM); —— 质控品; —— 室间比对样本 ; ——检测实验室送检样本 ; ——其他样本。 3.6,2,2 分析系列的结构分析样本按下列顺序排列 : —— 参考物质(RM); ——质控品; ——空白样本,如:生理盐水 ; ——被分析的“未知”物质。上述样本重复测定可减小测定结果不确定度。从一个样本到下一个样本的携带污染应小丁 0.5%。 3.6.2.3 分析部分 LDH参考方法测定的样本多为冻T粉或深低温的冰冻样本,测定前需处理为均匀的液状状态,分析部分应取白该液体样本。实验室需对待测的各种样本经过一定方法处理后,取出分析部分进行测定。丌机前检查 |∶ 罨霪 ∶嚣营 ∶裒彗清洁打印机温度探头:□与pH计连接完整电极:□tj pH计连接完整 □内液的量 □外液的量磁力搅拌器: □电源 □接地 □转速磁力搅拌r: □完袼 □清沽度 □磁力 PH标准溶液: □剩余鼓 □有效期每次应用前性能保证 : 更换电极内液和电极外液进行电极激活采用pH标准溶液进行校准应用前:□更换电极内液和电极外液:电极激活应用后:□更换电极内液和电极外液:电极保芥 □清洁温度探头、电极仪器性能保证顸防性维护 Ws/T361-ˉ 2011 对每一类型实验室样本应制定详尽的样本处理sOP文件,并有记录证实操作达到预期要求。实验室样本若为冻干粉或干粉,应使用质量与双蒸水类似的高纯度水(电导率(2us· cm l,pH6~7,硅酸盐(0,1mg· Ll)溶解;若为冷冻液体如冰冻ml清等,应按SOP义件在严格控制的条件下溶解。应有处理参考物质的方法和记录。测定过的样本有贮存待复查、销毁的文件和记录。 3.7 酶催化活性浓度测定 3,7.1 测定条件见表13。表13 LDH催化活性浓度测定条件 3.7.2 测定步骤(见图1) 3.7.2.1 监测比色杯内温度,达到要求时开始准备试剂和分析溶液。 3.7.2.2 将一份适当体积(约0,4mL)起始试剂溶液在37℃下平衡,剩余的起始试剂应保存在2℃~ 8℃。 3,7.2,3 将3.3.2中所列试剂体积按表14的顺序加人到反应杯中。表14 总体转换率测定的分析系统(LDH催化反应速率和空白率) 参数指标温度 37.0℃±0.1℃^ 波长 339nn、± 1nn`Ⅱ 带宽 ≤2nm 光径 10.00mm± 0,01m mn 孵育时问 180s 延迟时间 90s 测定时闸 180s 渎数(测定点) 彡≥6 扩展不确定度(虑=2) 体积测定步骤 2.00θ n1L 反应液平衡至37℃ 0 100mL 样本充分混合并孵育180s。在孵育结束时,反应杯中的溶液温庋应达到s7【 0,200mL 起始试剂溶液充分混合,等候90s,监测另外180s的时闸和吸光lJt 注:此动态光度测定的扩展(汝=2)合成不确定度(止态分布)不应超过1%。 (I比不确定度不包括波K调整的不确定度)。样本体积分数的扩展(乃=2)合成不确定度(lH态分布)应≤1%【、Vs/T 361-ˉ 2011 监浏比色杯内温度达37℃ 准备试剂和分析溶浓 ”育反应液试剂达37℃ 在比色杯内加入2.000mL反应液 37℃ 加入分析潜液0.100mL,充分混匀孵育180s 37℃ 加入启动试剂0,⒛O mL,充分混匀等符90s 监浏吸光度 180s 记录吸光度值处理数据涫洁比色杯图1 LDH参考方法测定流程图 3.7,3 最终完全反应混和物的浓度见表15。表15 LDH催化活性浓度测定最终完全反应混合物的浓度 3,7.4 试剂空白率测定为了测定试剂空白率,用9g· L1(15d mmol· L1)Na(∶l溶液代替样本.坝刂定方法同37.2。 3.7.5 样本空白率测定由于样本中存在乳酸.不町能测定样本空白率。参数指标 JV甲錾D-葡糖胺 pH(37ηC) 325mm()l· I' 9,4θ ± 0,05 I'(+)乳酸 β-NADˉ 50mmol· L 10n1n、ol· I'ˉ l β NAD¨ (白由酸) β-NΛD(锂盐) 样本容积分数 315mmol· L 6,85mmol· I' 0 0/t3 5(1 : 23) 扩展不确定度(虍=2〉、Vs/T 361-ˉ2011 3.7.6 结果确认在进行重要测定前(如给参考物质/校准品赋值、测定室问比对样本等),应先测定JCTLM和(或) 国家批准的参考物质,测定结果应在“靶值±不确定度”范围内,否则应确认建立方法的正确性。实验室应有s(〉P文件和记录证实此活动。 3.8 测定结果处理 3.8.1 测定结果计算及数据处理 3,8.1.1 计算通过回归分析(最小二乘法)计算吸光度随时间的改变Es l(min l)]。减去试剂空白率后。即校正后的样本吸光度变化率。按公式(1)计算LDH催化活性浓度 : ”LpH=F× (△Λ/△r)u,H ¨¨¨¨¨¨¨¨⋯⋯¨¨¨¨·(1) 式中: 诊 LL,「l —— I'DH催化活性浓度,单位为微凯塔尔每升(ukat· I'l)或单位每升(U· I' ); 「 —— 系数,等丁3651(在"9nm波长测定时,e"9(NADH)=630m'· morl); (△A/Ar).nH—— 经过试剂空白率校正后的样本吸光度变化率,单位为每秒(s l)或每分(min|)。 3.8.1.2 数据处理 3.8.1.2.1 数据剔除:必要时,每个实验室应建立适当的数据剔除规则。 3,8.1.2.2 计算每批次测定值的均值、标准差,必耍时应检查数据分布类型,计算均值的标准偏差(标准误)。 3.8.1.2.3 根据GUM和QUAM原则计算测定纬果不确定度。 3.8.2 酶活性单位及换算关系酶催化活性常用单位为kat· Ll,使用时常丨丨 |现多位小数,日前常以uht· Ll或nkaⅡ L l表示,但临床医学中仍习惯于使用U· Lˉ 1。换算关系如下 : 以U· Ll单位表示的催化浓度可通过乘以系数(/=0。01667)转化成ukat· L lc 3.9 分析可靠性 3.9.1 概念、价值及其应用应依据不确定度、精密度、线性范围、检出限等来评估LDH参考方法的分析可靠性。相关文献及参考方法的实验室测定数据表明本参考方法的分析性能优于临床酶活性浓度常规方法。适合于临床常规方法的溯源。 3.9.2 测定不确定度应根据GUM和QUAM原则计算测定不确定度。本参考方法测定结果的相对合成标准不确定度在浓度4.17ukat· Ll(250U· L )H寸宜小于1.5%。 3.9.3 精密度应根据本实验室测定条件评估建立的参考方法的重复性、复现性精密度。本参考方法测定 4.17‘火 kat· Ll(250U· Lˉ l)样本的重复性精密度官小于1,0%,实验室内复现性精密度官小于1.5%。 12 VVs/T361-ˉ 2011 3.9.4检出限与分光光度计的最小分析信号有关。本参考方法测定的最低检出限为O.22ukat· L (13.3U· I'l)。 3.9.5 线性范围线性范围(10.04`Ⅰh卜Ll(602,4U· Ll)。 3.9.6 误差的来源测定LDH活性之前.如果在反应杯中测定过ArI′ 或AsT,必须要考虑As'I′ /AL'I′ 测试混合液中 LDH的可能干扰。 3.10 通过实验室间比对进行确认 I'DH催化活性浓度参考方法由检验医学国际权威学术组织IFCC提出.经多个参考实验室认真评估后经JCTLM批准。甲在⒛世纪70年代,I「CC经过实验和讨沦,公布r30℃测定本酶的参考方法,并应用于临床,鉴于临床生化分析仪广泛应用37℃、IFCC在2002年颁布了取代30℃的37°C的 LDH原级参考方法。⒛02年得到JCTLM批准成为正式同际参考方法。 JCTI冫M在⒛03年的国际参考实验室能力比对计划∈REI'Λ 〕中将本酶列为比对项日之一。从历年比对结果看,大多数参加实验室测定结果都在均值±5,25%内,可确认此参考方法适合预期临床使用。经过广泛确认可达到临床医学特定应用的需要。中国从2006年开始有6个实验室参加此酶的RELA比对计划,⒛09年增至14个实验室。测定结果和国际一致。证实此参考方法可用于我国临床常规方法测定结果的溯源。 3,1l 参考区间初步调查男性与女性(≥17岁)的参考区间。性别参考值上限”(90%可信区间) 女性 4.12ukat· Ll(4.07ukat· Ll~4,25ukat· Ll) 男性 4,13ukat· Ll(4.05uka1· Ll~4.22uka1· I'l) 性别参考值卜限D(90%町信区间) 女性 2亻7U· L1(211U· Ll~255U· Ll) 男性 248U· Ll(243U· Lˉl~253U· Ll) 注:巾冂LDH催化活性浓度参考lx问尚在调查巾。 3.12 报告应设计适官的测定结果报告格式,包括但不限于以下内容 : — — mt清、雨浆或其他 ; —— 取样日期和测定日期 ; — — 测定所使用的参考方法:IFCC在37℃下测定LDH催化活性浓度的原级参考方法 ; — — 被测定的名称、测定结果数字值和测定单位 : 被氵贝刂定的名称:LL)H; 测定单位:ukat· Ll或U· Ll; l) 参考值上限指参照系的第975的百分位点.括号内为第9T5的百分位点的90%叫倍区问。 Ws/T361ˉ ˉ2011 —— 评定测定结果的不确定度:一般取虑=2; —— 样本异常特性记录:如溶血、黄疸、乳糜等 ; —— 测定方法的异常情况或改变测定方法记录。 3.13 质量保证 3,13,1 室内质量控制每个工作日开始正式测定样本前均测定质控品,当质控符合耍求后才进人正式测定。应建讧包括质控规则、操作步骤的室内质控s()P文件及记录。 3.13,2 室间质量控制评价定期参加IFCC和田内参考实验室能力比对,结果应符合耍求。当出现不符合情况时,应认真查找原lAl、建市失控及失控跟踪记录。 3,13.3 质量日志每个工作日完成工作日志及环境控制的质量记录。 14 附录 A (规范性附录) 不同温度下反应溶液的pH值表A,1 不同温度下反应溶液的pH值 Ws/T361-ˉ 2011 温度 ℃ pH 温度 ℃ pH 温度 ℃ pH 15.00 9,976 23,50 9.741 32.00 9.552 9 969 2s,75 9.734 32.25 9.516 9 962 24,00 9 728 32.50 9.509 9,955 24,25 9.721 327 9.503 9.948 24 50 9 71刂 3s 00 9 197 9~940 24.75 9~708 33 25 9 491 16.50 9.933 25.00 9. 9 485 9,926 9 695 33.75 9.479 17.00 9.919 25,50 9.688 s1.0θ 9.472 L7. 9.912 9.681 9.166 17.50 9.905 26.00 9.675 31.50 9.刂60 17.75 9.898 9.668 31.75 9.154 18.00 9.891 26,50 9.662 35.0θ 9 448 18.25 9,884 26.75 9.655 9.442 18.50 9.877 27.00 9.649 35 5θ 9 436 9.870 9.642 35.75 9.430 19.00 9~864 27.50 9.636 36.00 9 19.25 9.857 27.75 9.629 36 25 9 118 19. 9.830 28.00 9.623 (丨6.30 9 112 9.843 28.25 9 617 36.7s 9 406 20.00 9 836 28,50 9,610 94()() 20.25 )。829 28.7弓 9.6θ 4 ‘7 25 ) 394 20.50 9.822 29,00 9.597 37.50 9 388 20 75 9,815 29,25 9,591 37 75 9.382 21~00 9.809 29,50 9.585 9,s76 21 25 9 802 9,578 9 21.50 9 795 30,00 9,572 38 50 9 365 21.75 9.788 30.25 9,566 38.75 9,359 22,00 9 781 30,50 9 559 39.00 9 353 22.50 9 768 s1.00 9 547 3ll 50 } 9 3/l1 9.761 s1 25 9.5/lo s9~75 { 9 s35 2s.00 9 75/l 31,50 9 531 ⊥0,00 Ⅱ 9,330 23~25 9.748 31.75 9.528 15 、Vs/T 361-ˉ2011 附录 B (资料性附录) 试剂原料详细信息表表B.1 试剂原料详细信息表试剂系统名 N-甲基△)葡萄糖胺通用名甲葡胺信息指标容 CΛS,CΛ RN注册号 6284-40-8 生产厂家货号/批号分子式 C7Hli∶′刂O^ 相刈分子质壁 ˉˉJ兰: 纯度特定合格要求(女Π有) — — -ˉ | 危险度贮存要求失效期表B.2 试剂详细内容表试剂系统名 Iˇ (+)乳酸,一锂盐通用名~乳酸锂肃镶屦二二 △-△1二丬Γ△1二I二I二二二分子式相对分子质量纯庋菔榀耐 — — — 寸 ——— — — — ˉ — — — —ˉ ——————————————— ————————+————ˉ ——— ——————— —ˉ ———— 危险度 | — ˉ — — — — — — — — ˉ — — — — — — — — — — — — — — — ˉ — — — — — — — — — — — — -ˉ — — — — --— — — — — — — -— — — 信息指标 { 内容 | 贮存要求 | ˉ—————— ˉ————— ————— -———ˉ— —ˉˉˉ—ˉ— — —— △ 失效期、Vs/T 361-ˉ 2011 表B,3 试剂详细内容表试剂系统名氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,游离酸通用名 NAD游离酸表B,4 试剂详细内容表试剂系统名氧化型β-烟酰胂 ` 通用名皿表B.5 试剂详细内容表试剂系统名盐酸信息指标内容 CAS,CARN汨 :丿毋兮 53-84-9 生产厂家货号/批弓分子式 C'1Hzf N7Θ ll Pz 相对分子质量纯度特定合格要求(女口有) 危险度 s24/25 贮存要求失效期信息指标内容 CΛS,CARN注llI号 61417-72-7 生产厂家货号/批号分子式 C?1H2“ N7014Pz Li· 2H20 相对分子质量纯度特定合格要求(如有) 危险度贮存要求矢效期信息指标内容 CAS,CARN注册号 7647-01-o 生产厂家货号/批号分子式 HCl 相对分子质量纯度特定合格要求(如有) 危险度贮存要求失效期 17 Ws/T361-ˉ 2011 试剂系统名氢化钠表 B。6 试剂详细内容表信息指标内容 CΛ S,CΛRN注册号 7617-11 佶息指标内容生产厂家货号/批号分子式 NaCl 棚对分子质量纯度 58,14 特定合格要求(如有) 危险度 R36,R22,S24/25 贮存要求失效期 Ws/T361-2011 附录 C (资料性附录) LDH IFCC37℃参考方法与30℃参考方法的比较 C,1 目前的SOP源白IFCC参考方法,该参考方法为LDH的催化活性浓度的测定提供了最佳条件。由37℃取代30℃作为测定温度,只需对某些测定参数进行微小的改变即可保留最适的测定条件。 C。2 附录巾列出了修改并对其进行解释。另外,如果与30℃参考方法比较时,为提高测定的高标准化而需要更准确的说明是必要的。参见表C,1。表C.1 37℃和30℃参考方法的比较测定样本校准物质、标准品和人血清参考方法主耍用于校准物和质控温,的测定调节测定温度的不确定度偏倚:小于±0.05℃ 不确定度≤0,l°C(虑=2) 不精密度:小于±0,1℃ 带有温度调节和控温装置的高质世分光光度计可使温度测定的不确定度(虍=2)≤θ,1℃ pH值调节的不确定度 ΔpH± θ 05 {无特别耍求延迟时闸测定时问反应速率是非线性的,并J非线性部分随着时问和LDH催化浓皮成比例的增加,缩短测定时闸意味右减少‖线忤注加体积及体积分数溶液R 2000uL lllL清 100uL 起始反应液200uL 起始试剂溶液 NAD游离酸和NAD锂盐的水'": 猊含物缓冲储存溶液不制备缓冲储存溶液使用前起始试剂的温度用底物启动:使用前起始试剂的温度应为37° C。未叙述要平衡起始溶液温度采用适宜丁常规吸坩体系的体积‘冈此试剂溶液n勺浓度应适合新的体积分数(样本体积分数n勺变化从1:21到1:23) |应用室湍的起始液会降低反应杯内的温度 | 溶液R 2700uL 血清 150uL 起始反应液300uL NAD游离酸作为起始试剃会改变反应混合物的 NAD游离酸水忤溶液 |pH值。NAD游离酸和NAD锉盐的混合物更稳土 :些些望豇ξ 不必0Kh准备缓冲储存溶液 3θ ℃参考方法 37℃IFCC参考方法加人初始试剂溶液后,试刹空白速率仍有非线性有缓冲储存溶液 | ~ ~~ ˉ~ˉ Ws/T361ˉ ˉ2011 表C1(续 ) 37℃I「CC参考方法数据采集 30℃′参考方法解释渎数次数≥6 连续监测吸光皮的升高现代分光光度计使川数码数据处理系统.渎数次数≥6可以保证Jt测定结果足够的精确.不再使用迕续监测装昔斜率的确定(H寸问对吸光度) 最小平方差的回归分析方法无信息需要个明确的统计学方法以确保斜率计算的可霓笈性参考范u丨女忤和男性≤412ukat (≤2`15U· Ll) 瓦蚕琉篮楂^l { | 男忤和女性的参考范围分别进行调查、Vs/T 361-ˉ 2011 参考文献 E1] lS015193:2009In vitro diagnostic medical devices— Meas11rement of quanti1ies in samples of biological origin—-Presentation of reference measurement procedures E2] JCTLM;1「CC reference measurement procedure(37℃)for LDH.2002 E3] BIPM/IEC/IFCC/ISΘ /IUPAC/IUPAP/OIML;Guide to the expression of uncertainty in measurement.GtJˇ 11993 E4] EURACHE/CITAC;Quantifing Uncertainty in Analytical Measurement QUAM2000 ∶ ?l