抗体入厂检验标准 — 纯度/活性/交叉反应/批次一致性/无菌性五项验收

抗体(单抗/多抗)入厂检验标准(每批次验收): 一、纯度(SDS-PAGE+SEC-HPLC): SDS-PAGE:非还原电泳→重链+轻链条带清晰可见/杂带<5%总蛋白→纯度≥95%。SEC-HPLC:主峰面积≥95%总峰面积→无聚集物(高MW肩峰)/无降解物(低MW肩峰)。IgG完整性>90%(多抗/IgG重链+轻链条带的积分密度)。商品化抗体的COA纯度<90%→拒收。 二、亲和力(ELISA/Biacore): 直接ELISA法:包被抗原梯度(0.01~10μg/mL)→加入固定浓度抗体(1μg/mL)→测OD450→拟合饱和曲线→计算KD。标准:Ka≥10⁸M⁻¹(胶体金试纸条)/优选≥10⁹M⁻¹。竞争ELISA法(半抗原/小分子):包被抗原→加入待测物竞争→测IC50→IC50越小灵敏度越高。标准:IC50与标准批偏差<±30%。 三、交叉反应率(特异性/每批必做): 将抗体与至少10种结构类似物/同家族蛋白做ELISA结合测试→交叉反应率=类似物OD/目标物OD×100%。标准:<1%为合格(定性试纸条)/<0.5%为优秀。与标准批交叉反应模式一致(无新增交叉反应物)。 四、批次间活性一致性(放行标准): 用标准批参考抗体与待验收抗体做直接ELISA结合曲线对比→两条曲线在5~10个浓度点基本重叠(偏差<±20%)。不同批次抗体的ELISA 50%最大结合浓度(EC50)与标准批偏差<±20%可放行。偏差超限→调整标记用量(标记量=标准量×标准批EC50/本批EC50)。 五、微生物限度/无菌性: 抗体溶液需0.22μm无菌过滤→分装前检测细菌内毒素<0.5EU/mg(用于临床人体检测的试剂要求)。外观:溶液澄清+无色至微黄/无浑浊/无沉淀/无可见颗粒。 六、储存与有效期: -20°C冻存(避免反复冻融→分装100μL单次用量)。4°C短期保存加NaN₃ 0.02%有效期≤3个月。冻融后4°C放置>1周或反复冻融>3次→活性显著下降→ELISA重测确认后方可使用。 来源:Thermo Fisher抗体质量指南+NMPA体外诊断试剂原材料管理指导原则