酶联免疫吸附试验(ELISA)技术要点 — CLSI + NMPA

酶联免疫吸附试验（ELISA）技术要点： 基本原理：固相载体包被抗原/抗体→酶标记抗体→底物显色→酶标仪读数 主要模式： 双抗夹心法：包被Ab1→样本Ag→酶标Ab2（大分子，≥2个表位） 竞争法：包被Ag+样本Ag竞争结合酶标Ab（小分子半抗原） 间接法：包被Ag→样本Ab→酶标抗人IgG（抗体检测为主） 关键工艺参数： - 包被条件：碳酸盐缓冲液pH9.6，4℃过夜或37℃2h - 封闭：1~5% BSA或脱脂奶粉，37℃1h - 酶标二抗稀释度：1:5000~1:20000 - 底物：HRP用TMB，ALP用pNPP - 终止液：2M H₂SO₄(TMB)，3M NaOH(pNPP) 性能参数（方法学固有）： 灵敏度：ng~pg/mL级 线性范围：约30倍（动态范围较窄） 时间：总反应约2~3h 自动化：已有全自动酶免仪，但仍慢于化学发光 局限（vs化学发光）： 灵敏度低10~100倍 线性范围窄(30倍 vs 10⁵倍) 检测时间长(2~3h vs <30min) 手工操作步骤多，CV较差 应用定位： 适合基层医院、大批量筛查、定性/半定量检测 逐步被化学发光替代，但仍有一定市场份额 来源：CLSI通用指南 + NMPA酶免试剂注册要求