胶体金试纸标准实验操作指南(SOP) — 丁香园TomBacon老师
胶体金试纸条标准操作指南（丁香园版主TomBacon，行业经典入门教材）：
1. 胶体金制备:
方法: 柠檬酸三钠还原法（Frens法）
关键: 100mL 0.01% HAuCl4煮沸，迅速加入1%柠檬酸三钠1~4mL（量决定粒径）
验证: 肉眼均匀酒红色+UV-Vis λmax 520~530nm+无沉淀
2. 标记pH确定:
原则: pH=抗体pI+0.5~1.0
实操: 0.1M K2CO3逐滴调pH，梯度试验
单抗常用pH: 8.0~8.5
测量: Whatman精密pH试纸（禁用pH计，电极易被金堵塞）
3. 最佳蛋白标记量:
方法: NaCl破坏试验
判定: 维持红色的最低抗体量×1.2
夹心法: 10~20μg抗体/mL金溶液
竞争法: 1~5μg抗体/mL金溶液
过多→拖带；过少→灵敏度降低
4. 标记后封闭:
BSA终浓度0.5%，搅拌15min
PEG20000终浓度0.1%，搅拌15min
5. 离心纯化:
8000~9000 RPM，4℃，1小时
弃上清，保护性稀释液重悬
6. 膜孔径选择:
以4cm层析流速定义: 90s/120s/135s(最常用)/180s/240s
流速越小=孔径越小=灵敏度越高
品牌: Whatman(FF120/AE99)>S&S>Millipore>Sartorius
7. 点膜参数:
环境湿度: 45%~65%（过低→静电散点，过高→T线扩散）
点膜方式: 非接触喷点 > 划膜式（划膜产生压痕→层析阻力）
干燥: 37℃彻底干燥2~4h，湿度降至20%以下
8. 封闭: 多数情况不需要封闭。仅出现非特异条带或拖带时才考虑。
来源: 丁香园TomBacon《胶体金试纸-标准实验操作指南》